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慢病毒構建并包裝后，以進行貼壁細胞或懸浮細胞的轉染。具體流程如下： 1. 對慢病毒基因進行改造，即敲除U3端的400bp的特定基因，使其逆轉錄和整合的能力，但保留產(chǎn)生病毒顆粒必須的蛋白的能力。 2. 向上述基因中插入目的基因。與具有包裝功能的質粒同時進行對包裝細胞的轉染。在細胞上清中獲得攜帶目的基因的復制缺陷型慢病毒載體顆粒。

三種擴大貼壁細胞培養(yǎng)的方法：維持其在培養(yǎng)皿表面（2D）的生長狀態(tài)，進行傳代培養(yǎng)放大；進行貼壁細胞分離，隨后在發(fā)酵罐的3D培養(yǎng)中進行小試到大規(guī)模的逐級放大；采用含有微載體的攪拌發(fā)酵罐進行培養(yǎng)。2D培養(yǎng)即采用多培養(yǎng)皿或多層搖瓶進行培養(yǎng)放大。

傳代培養(yǎng)是指需要將培養(yǎng)物分割成小的部分，重新接種到另外的培養(yǎng)器皿（瓶）內，再進行培養(yǎng)的過程。$n$n原理：細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續(xù)生長，同時也將細胞數(shù)量擴大，須進行傳代再培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系獲得的具有特殊性質的細胞。因此，欲構建細胞株，首先需獲得穩(wěn)定的細胞系。構建流程如下： 1. 細胞培養(yǎng)（原核：大腸桿菌，真核：CHO細胞） 2. 質粒的瞬時轉染。 3. 向轉染后的細胞培養(yǎng)基中加入抗生素規(guī)定濃度的抗生素進行穩(wěn)定細胞株篩選。 4. Western blot或ELISA檢測蛋白的表達情況，篩選比較高克隆進行傳代并保存

凡是來源于胚胎、組織器官及外周血，經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細胞稱之為原代細胞。人或動物體內（或胚胎組織）由于多種細胞結合緊密，不利于各個細胞在體外培養(yǎng)中生長繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細胞解離出來。

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。